Glutathione aparece com frequência em conversas e raramente com contexto. Aqui vão primeiro os fundamentos, depois as considerações práticas.
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Um requisito típico para a identificação de proteínas com base na análise de pegada de massa de peptídeos é a obtenção de uma proteína isolada. As misturas com mais de 2 a 3 proteínas requerem frequentemente o uso adicional de espectrometria de massas em tandem (MS/MS) para alcançar especificidade suficiente. Assim sendo, as amostras típicas para a análise de pegada de massa de peptídeos são proteínas isoladas por eletroforese bidimensional em gel (géis 2D) ou bandas isoladas por SDS-PAGE. Análises adicionais de MS/MS podem ser diretas, como por exemplo, análises MALDI-TOF/TOF, ou análises subsequentes por nanoLC-ESI-MS/MS dos eluatos das manchas de gel.
Fontes: pt.wikipedia.org
== Origens == A análise de pegadas de massas de peptídeos foi desenvolvida devido ao longo e tedioso processo de análise de proteínas. A degradação de Edman, utilizada na análise de proteínas, demorava quase uma hora a analisar um resíduo de aminoácido. A SDS-PAGE também tem sido utilizada para separar proteínas em misturas muito complexas, que também empregam electrotransferência e métodos de coloração. As bandas são então extraídas do gel e sequenciadas automaticamente. Um problema recorrente no processo era que as proteínas interferentes eram também purificadas juntamente com a proteína de interesse. As sequências destas proteínas interferentes foram compiladas no que ficou conhecido como base de dados Dayhoff. Por fim, a presença das sequências destas proteínas contaminantes nas bases de dados reduziu o tempo instrumental e o custo da análise proteica.
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== Preparação da amostra == As amostras de proteínas podem ser obtidas por SDS-PAGE ou HPLC de fase reversa e depois submetidas a algumas modificações químicas. As ligações dissulfeto das proteínas são reduzidas e os aminoácidos cisteína são quimicamente carbamidometilados ou acrilamidizados durante a eletroforese em gel. As proteínas são depois clivadas em vários fragmentos utilizando enzimas proteolíticas (proteasess) como a tripsina, quimotripsina ou Glu-C. Uma relação amostra:protease típica é de 50:1. A proteólise é geralmente realizada durante a noite e os peptídeos resultantes são extraídos com acetonitrila e secos a vácuo. Os péptidos são depois dissolvidos numa pequena quantidade de água destilada ou ainda mais concentrados e purificados, estando prontos para análise por espectrometria de massas.
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== Análise por espectrometria de massas == A proteína digerida pode ser analisada com diferentes tipos de espectrómetros de massas, como o ESI-TOF ou o MALDI-TOF. O MALDI-TOF é geralmente o instrumento preferido, pois permite uma elevada produtividade das amostras e a análise de múltiplas proteínas numa única experiência, se complementado com análise MS/MS. A LC/ESI-MS e a CE/ESI-MS são também excelentes técnicas para a identificação de péptidos por espectrometria de massas. Uma pequena fracção do peptídeo (geralmente 1 microlitro ou menos) é pipetada sobre uma placa alvo MALDI e um composto químico denominado matriz MALDI é adicionado à mistura de peptídeos. As matrizes comuns são ácido sinapínico, ácido alfa-ciano-4-hidroxicinâmico e ácido 2,3-di-hidroxibenzoico. As moléculas da matriz são necessárias para a dessorção das moléculas de peptídeo. A matriz e as moléculas de peptídeo co-cristalizam na placa alvo MALDI e estão prontas para análise. Existe uma técnica predominante de preparação de amostras para MALDI-MS denominada técnica da gota seca. O alvo é inserido na câmara de vácuo do espectrómetro de massas e a dessorção e ionização dos fragmentos peptídicos é iniciada por um feixe de laser pulsado que transfere grandes quantidades de energia para as moléculas da matriz. A transferência de energia é suficientemente grande para promover a ionização e a transição das moléculas da matriz e dos péptidos da fase sólida para a fase gasosa.
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Glutathione é resumido aqui a partir de literatura pública: definição, contexto e pontos recorrentes na prática. Informação geral, não aconselhamento médico.
A pesquisa sobre Glutathione apoia-se sobretudo em estudos de laboratório e modelos animais; dados clínicos variam conforme a substância.
Pureza e análise (HPLC, espectrometria de massa), reconstituição correta e armazenamento adequado são decisivos.%!(EXTRA string=Glutathione)
Nem todos os mecanismos estão demonstrados e um estudo isolado não é evidência global. As questões abertas são sinalizadas.%!(EXTRA string=Glutathione)